Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14215:2024 về Phân bón - Định lượng Saccharomyces sp. bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc được ban hành nhằm thống nhất phương pháp xác định mật độ nấm men Saccharomyces sp. trong các sản phẩm phân bón vi sinh vật và phân bón hữu cơ vi sinh tại Việt Nam. Tiêu chuẩn này cung cấp một quy trình kỹ thuật chuẩn hóa, giúp các cơ quan quản lý và doanh nghiệp kiểm soát chặt chẽ chất lượng phân bón lưu thông trên thị trường.

Phạm vi áp dụng của tiêu chuẩn

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng nấm men Saccharomyces sp. trong các loại phân bón bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở điều kiện hiếu khí. Đối tượng áp dụng bao gồm:

• Các tổ chức, cá nhân sản xuất, kinh doanh, nhập khẩu và kiểm nghiệm chất lượng phân bón vi sinh vật tại Việt Nam.
• Các cơ quan quản lý nhà nước có thẩm quyền và các phòng thử nghiệm được chỉ định thực hiện việc đánh giá sự phù hợp của phân bón.

Tài liệu viện dẫn liên quan

Để áp dụng tiêu chuẩn này một cách chính xác, các phòng thử nghiệm cần viện dẫn và phối hợp áp dụng các tiêu chuẩn quốc gia hiện hành về nguyên tắc chung kiểm tra vi sinh vật, phương pháp lấy mẫu phân bón, cũng như các quy trình chuẩn bị mẫu thử nghiệm vi sinh lâm sàng và nông nghiệp để đảm bảo tính đồng bộ và độ tin cậy của kết quả phân tích.

Thuật ngữ và định nghĩa cốt lõi

Trong phạm vi tiêu chuẩn này, thuật ngữ Saccharomyces sp. được định nghĩa là nhóm nấm men có khả năng sinh trưởng, phát triển và hình thành các khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường nuôi cấy chuyên dụng dưới các điều kiện nhiệt độ và thời gian quy định. Khuẩn lạc của chúng thường có màu trắng đục, bề mặt mịn hoặc hơi nhăn, rìa đều và có mùi thơm lên men đặc trưng.

Nguyên tắc của phương pháp định lượng

Phương pháp định lượng Saccharomyces sp. bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc tuân thủ nghiêm ngặt theo các bước kỹ thuật sau:

• Chuẩn bị dịch huyền phù ban đầu: Tiến hành cân một lượng mẫu phân bón xác định, hòa tan và đồng nhất trong dung dịch pha loãng chuyên dụng để giải phóng hoàn toàn các tế bào nấm men ra khỏi thể nền của mẫu.
• Pha loãng thập phân: Thực hiện pha loãng dịch huyền phù ban đầu theo các bậc thập phân liên tiếp (10 mũ -1, 10 mũ -2, 10 mũ -3...) để thu được nồng độ mật độ vi sinh vật thích hợp cho việc đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch.
• Nuôi cấy trên môi trường chọn lọc: Sử dụng phương pháp cấy trải hoặc cấy đổ đĩa dịch mẫu đã pha loãng lên môi trường thạch dinh dưỡng thích hợp (như thạch Sabouraud hoặc môi trường tương đương có bổ sung kháng sinh để ức chế vi khuẩn).
• Ủ ấm: Tiến hành ủ các đĩa petri trong tủ ấm ở nhiệt độ từ 25 độ C đến 30 độ C trong khoảng thời gian từ 48 giờ đến 72 giờ để nấm men phát triển thành các khuẩn lạc có thể quan sát và nhận biết rõ ràng.
• Đếm và tính toán kết quả: Chọn các đĩa có số lượng khuẩn lạc nằm trong khoảng tối ưu (thường từ 15 đến 150 khuẩn lạc), thực hiện đếm số khuẩn lạc Saccharomyces sp. đặc trưng và áp dụng công thức toán học để tính toán mật độ tế bào, biểu thị bằng đơn vị hình thành khuẩn lạc trên một gam hoặc một mililít mẫu (CFU/g hoặc CFU/mL).

Hiệu lực thi hành

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14215:2024 có hiệu lực thi hành kể từ ngày ban hành. Tiêu chuẩn này đóng vai trò là công cụ kỹ thuật pháp lý quan trọng, giúp minh bạch hóa hoạt động kiểm tra chất lượng phân bón vi sinh, bảo vệ quyền lợi hợp pháp của người nông dân và thúc đẩy nền nông nghiệp hữu cơ bền vững.