TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 14113:2024

PHÂN BÓN - ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS SUBTILIS BẰNG KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC VÀ PCR

Fertilizers - Enumeration of Bacillus subtilis by colony count method and PCR

Lời nói đầu

TCVN 14113:2024 do Học viện Nông nghiệp Việt Nam biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

PHÂN BÓN - ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS SUBTILIS BẰNG KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC VÀ PCR

Fertilizers - Enumeration of Bacillus subtilis by colony count method and PCR

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng vi khuẩn Bacillus subtilis có trong phân bón hoặc nguyên liệu sản xuất phân bón vi sinh bằng phương pháp đếm khuẩn lạc và nhân gen đặc hiệu. Trong đó, sự có mặt của vi khuẩn Bacillus subtilis trong phân bón được khẳng định nhờ nhân gen đặc hiệu aroE và pycA bằng kỹ thuật PCR. Tiêu chuẩn có thể áp dụng cho phân bón hoặc nguyên liệu sản xuất phân bón vi sinh vật dạng lỏng và dạng rắn.

2  Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các bản sửa đổi, bổ sung (nếu có).

TCVN 6404: 2016 (ISO 7218:2007 with amendment 1:2013), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung và hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật

TCVN 8128:2015 (ISO 11133:2014), Vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và nước. Chuẩn bị, sản xuất, bảo quản và thừ hiệu năng của môi trường nuôi cấy

TCVN 13637:2023 (ISO 21148:2017), Mỹ phẩm - Vi sinh vật - Hướng dẫn chung về kiểm tra chỉ tiêu vi sinh vật

TCVN 12105:2018 Phân bón vi sinh vật - Lấy mẫu.

3  Thuật ngữ và định nghĩa

Trong tiêu chuẩn này áp dụng các thuật ngữ và định nghĩa sau:

3.1

Mẫu thử nghiệm

Là một phần mẫu được lấy từ mẫu phân bón. Phân bón được lấy mẫu theo quy định (TCVN 12105:2018).

3.2

Nhóm Bacillus subtilis giả định

Nhóm vi sinh vật hình thành các khuẩn lạc điển hình, có đặc điểm hình thái đặc trưng của nhóm vi khuẩn Bacillus sp.

3.3

Gen đặc hiệu aroE (shikimate dehydrogenase)

aroE là gen có kích thước 843 bp, trong đó có 322 vị trí đa hình, có mức độ tương đồng 98,8%- 99,9% giữa các chủng Bacillus subtilis. Ngược lại, mức độ tương đồng chỉ đạt 67,0%-74,6% với các loài Bacillus khác. Mỗi đặc hiệu được thiết kế để nhân vùng bảo thủ của Bacillus subtilis có kích thước 278 bp và vùng này không có mặt ở các loài Bacillus khác.

3.4

Gen pycA (pyruvate carboxylase)

pycA là gen có kích thước 3450 bp, trong đó có 1075 vị trí đa hình, có mức độ tương đồng 98,9%- 100% giữa các chủng Bacillus subtilis. Ngược lại, mức độ tương đồng của gen này chỉ đạt 79,7%- 82,1% với các loài Bacillus khác. Mỗi đặc hiệu được thiết kế để nhân vùng bảo thủ của Bacillus subtilis có kích thước 233 bp và vùng này không có mặt ở các loài Bacillus khác.

4  Nguyên tắc

4.1  Định tính vi khuẩn Bacillus subtilis thông qua phân tíc