Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12321:2018 về Bia - Xác định hàm lượng polyphenol tổng số - Phương pháp quang phổ được ban hành năm 2018, quy định phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng số trong bia bằng phương pháp đo phổ hấp thụ phân tử (quang phổ).

Phạm vi và đối tượng áp dụng

• Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn này quy định phương pháp quang phổ để xác định hàm lượng polyphenol tổng số trong các sản phẩm bia.
• Đối tượng áp dụng: Các phòng thử nghiệm, cơ quan kiểm định chất lượng sản phẩm, và các nhà sản xuất bia trong việc phân tích, kiểm nghiệm và kiểm soát chất lượng sản phẩm bia tại Việt Nam.

Nguyên lý của phương pháp

• Mẫu bia sau khi loại bỏ carbon dioxide được cho phản ứng với ion sắt (III) trong môi trường kiềm yếu.
• Hợp chất polyphenol có trong bia sẽ phản ứng với sắt (III) để tạo thành một phức chất màu đỏ-nâu có độ bền cao trong dung dịch carboxymethylcellulose (CMC).
• Độ hấp thụ quang của phức chất này được đo bằng máy đo quang phổ ở bước sóng 600 nm để xác định hàm lượng polyphenol tổng số.

Thiết bị, dụng cụ và hóa chất yêu cầu

• Thiết bị và dụng cụ: Máy đo quang phổ có khả năng đo ở bước sóng 600 nm; cuvet có chiều dài đường truyền quang 10 mm; bình định mức, pipet, máy lắc và các dụng cụ thủy tinh thông thường trong phòng thử nghiệm.
• Hóa chất và thuốc thử: Dung dịch carboxymethylcellulose (CMC) kết hợp với muối dinatri của axit ethylendiamintetraaxetic (EDTA) làm chất ổn định; thuốc thử sắt (dung dịch sắt amoni citrat); dung dịch amoniac loãng để tạo môi trường kiềm; nước cất hoặc nước có độ tinh khiết tương đương.

Quy trình xác định hàm lượng polyphenol

• Chuẩn bị mẫu thử: Tiến hành đuổi hết khí carbon dioxide (CO2) ra khỏi mẫu bia bằng cách lọc hoặc lắc mạnh trước khi tiến hành phân tích. Mẫu bia phải đạt nhiệt độ phòng trước khi đo.
• Tiến hành phản ứng: Cho một thể tích mẫu bia xác định vào bình định mức, thêm dung dịch CMC/EDTA, thuốc thử sắt và dung dịch amoniac theo đúng tỷ lệ quy định, sau đó định mức bằng nước cất và lắc đều.
• Chuẩn bị mẫu trắng: Tiến hành song song một mẫu trắng bằng cách thay thế thuốc thử sắt bằng nước cất hoặc dung dịch hiệu chỉnh tương đương để loại bỏ ảnh hưởng của màu và độ đục tự nhiên của bia.
• Đo quang phổ: Để yên hỗn hợp phản ứng trong khoảng thời gian quy định (thường là 10 phút) để màu phát triển ổn định, sau đó tiến hành đo độ hấp thụ quang của mẫu thử so với mẫu trắng ở bước sóng 600 nm.

Tính toán và biểu thị kết quả

• Hàm lượng polyphenol tổng số trong mẫu bia (tính bằng miligam trên lít - mg/l) được tính toán dựa trên hiệu số giữa độ hấp thụ quang của mẫu thử và mẫu trắng, nhân với hệ số pha loãng và hệ số thực nghiệm quy định trong tiêu chuẩn.
• Kết quả thử nghiệm được làm tròn và biểu thị theo quy định để đảm bảo tính chính xác, thống nhất và có thể so sánh giữa các phòng thử nghiệm.

Hiệu lực thi hành

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12321:2018 có hiệu lực áp dụng kể từ ngày công bố, đóng vai trò là công cụ kỹ thuật quan trọng giúp các doanh nghiệp và cơ quan quản lý kiểm soát chất lượng và độ an toàn của các sản phẩm bia lưu thông trên thị trường.